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熒光定量PCR技術平臺





        實時熒光定量PCR是一種實時監控PCR反應過程中核酸擴增的技術,通常可以在PCR反應體系中加入熒光標記物,利用熒光信號的變化實現對初始模板的定量分析。

        根據熒光標記物的不同,熒光定量PCR的原理一般可分為Taqman探針法和熒光染料法。Taqman探針法是通過在PCR反應中加入5’端有熒光基團修飾的水解探針,利用PCR延伸(extending)過程中DNA聚合酶的外切酶活性降解水解探針,以釋放熒光基團,通過檢測熒光信號強度來監控PCR擴增。而熒光染料法則是在PCR反應中加入熒光染料如SYBR Green I等,熒光染料在嵌入到雙鏈DNA時,能夠檢測到極強的熒光信號,且熒光強度與雙鏈DNA量成正比,因此檢測熒光強度能監控PCR的擴增。

       與常規PCR技術相比,實時熒光定量PCR的最大特點在于加入了熒光染料或者Taqman探針,可以對初始模板進行精確定量分析;同時其檢測靈敏度、特異性、精確性與常規PCR相比均有較大優勢;此外,實時熒光定量PCR的擴增和檢測同步完成,不需開蓋操作,不僅極大減少交叉污染的概率,且自動化程度得到極大提高;如果加入的是熒光染料,還可以對PCR產物進行熔解曲線分析。

      目前,旌準醫療已經引進了美國賽默飛世爾(ThermoFisher)、羅氏(Roche)、安捷倫(Agilent)、伯樂(Rio-Rad)、IT-IS等公司和品牌的各型實時熒光定量PCR系統。基于以上的熒光定量PCR系統,我們正在開展病原微生物基因檢測、藥物基因組學SNP檢測、腫瘤基因檢測、基因甲基化檢測等臨床分子診斷試劑的研發工作,并將繼續應用范圍擴大到科研服務等領域。





                          

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